Versterkingsproblemen

1. Welke problemen kunnen ontstaan ​​door PCR-amplificatie??
2. Waarom is er geen versterking in PCR?
3. Wat veroorzaakt amplificatie in PCR?
4. Wat veroorzaakt PCR-mislukking??

Welke problemen kunnen ontstaan ​​door PCR-amplificatie??

Veel van de veelvoorkomende problemen met PCR en RT-PCR worden geïdentificeerd tijdens agarosegelelektroforese van de reactieproducten. Deze omvatten de afwezigheid van het verwachte amplificatieproduct, de aanwezigheid van niet-specifieke producten, overmatige uitsmering en de aanwezigheid van een "primerdimeer" -band.

Waarom is er geen versterking in PCR?

DNA-polymerase-enzym werkt niet

Het DNA-polymerase-enzym is verantwoordelijk voor de verlenging van de gebonden primers langs de matrijs-DNA-strengen. Als dit enzym niet meer zo efficiënt is, misschien als gevolg van bevriezen-ontdooien, dan zal de extensiestap tijdens de PCR-reactie onvolledig zijn, waardoor u geen PCR-product krijgt.

Wat veroorzaakt amplificatie in PCR?

Basis PCR. Het PCR-proces is oorspronkelijk ontwikkeld om korte segmenten van een langer DNA-molecuul te amplificeren (Saiki et al. 1985). Een typische amplificatiereactie omvat doelwit-DNA, een thermostabiel DNA-polymerase, twee oligonucleotide-primers, deoxynucleotide-trifosfaten (dNTP's), reactiebuffer en magnesium.

Wat veroorzaakt PCR-mislukking??

Meestal is het eerste wat onderzoekers doen een defect enzym of reagens de schuld geven wanneer een experiment mislukt, maar met PCR is dit eigenlijk minder waarschijnlijk de oorzaak van het mislukken. Vaker zijn diepere interne problemen zoals primerontwerp, thermocyclerparameters of niet-specifieke binding aan andere templatesequenties de oorzaak.