Topmusicanswers
In plaats daarvan moeten de PCR-omstandigheden worden geoptimaliseerd; houd rekening met het volgende bij het aanpassen van de PCR-condities:
- Verminder de hoeveelheid sjabloon.
- Verhoog de gloeitemperatuur:.
- Touchdown-PCR gebruiken.
- Verminder het aantal PCR-cycli.
- Herontwerp de primers.
- Gebruik geneste primers.
- Het product opnieuw versterken.
- Waarom werkt mijn PCR niet??
- Hoe optimaliseer je PCR-omstandigheden??
- Wat veroorzaakt smeren in PCR?
- Hoe weet u of PCR besmet is??
Waarom werkt mijn PCR niet??
Het vergeten van slechts één component van de PCR-reactie, of dat nu de DNA-polymerase, primers of zelfs het sjabloon-DNA is, zal resulteren in een mislukte reactie. De eenvoudigste oplossing is om de reactie te herhalen. ... Als er hierna nog steeds geen PCR-product is, is de kans groot dat iets anders uw reactie belemmert.
Hoe optimaliseer je PCR-omstandigheden??
PCR-voorwaarden
- Gebruik hogere denaturatietemperaturen (e.G., 98°C in plaats van 94°C of 95°C) om volledige denaturatie van de template mogelijk te maken.
- Houd de gloeitijden voor GC-rijke sjablonen zo kort mogelijk.
- Gebruik primers met een hogere Tm (>68°C), omdat gloeien bij een hogere temperatuur kan plaatsvinden.
Wat veroorzaakt smeren in PCR?
DNA-besmetting, RNA in DNA-monster, hoge DNA-concentratie in de PCR-reactie kan uitsmeren veroorzaken. ... DNA-uitsmering wordt meestal in planten veroorzaakt door een hoge concentratie van template-DNA.
Hoe weet u of PCR besmet is??
Om de oplossing op verontreiniging te controleren, stelt u negatieve controlereacties samen met nieuwe reagentia waarvan bekend is dat ze niet verontreinigd zijn, en voegt u een van de verdachte oplossingen toe aan elke reactie. Die reactie toont geamplificeerde producten die wijzen op besmetting, is het bewijs dat de toegevoegde oplossing besmet was.
